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細胞接收后的處理:
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代。
英文簡稱
規格
貨號
CTX-TNA2:CTXTNA2
1×106
P-X1128
產品詳情:
細胞介紹
CTX TNA2細胞系建立于1日齡大鼠腦額葉皮層組織的1型星形膠質細胞原代培養物中。在含有鼠磷酸甘油酸激酶基因啟動子的人GFAP啟動子(pGFA-SV-Tt)和pPGK-neo的轉錄控制下,在含有SV40的致癌早期區域的DNA構建體初次鋪板后3天轉染培養物。用G418篩選轉染子,克隆。
細胞特性
1)來源:大鼠
2)形態:貼壁
3)含量:>1x106細胞數
4)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用。
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1)準備DMEM培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
實驗原理:

公司正在出售的產品:
17β羥類固醇脫氫酶14/17β-HSD14抗體 |
血清類粘蛋白1樣蛋白1+2+3抗體 |
HSD17B14 |
Toll樣受體2抗體 Anti-TLR2/CD282 |
Fyn結合蛋白抗體 |
CAB39 |
ADAP/FYB |
鈣結合蛋白39抗體 |
血小板源性生長因子A抗體 Anti-PDGF-A |
ORMDL1 + ORMDL2 + ORMDL3 |
磷酸化丙酮酸脫氫酶α1抗體 Anti-phospho-PDHA1(Ser293) |
Epoxide hydrolase 1 |
SUGT1蛋白抗體 Anti-SUGT1 |
動力蛋白輕鏈 |
環氧化物水解酶1抗體 |
DYNLT1 |
大鼠P21蛋白(P21)elisa分析檢測試劑盒 |
鋅指蛋白ZBTB6抗體 Anti-ZBTB6/ZNF482 |
P21 ELISA Kit |
鈉鉀離子轉運蛋白1抗體 Anti-NKCC1 |
人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)elisa分析檢測試劑盒 |
環指蛋白130抗體 Anti-RNF130 |
MPIF-1ELISAKit |
三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員8抗體 Anti-STSL/ABCG8 |
細胞半胱-10(CASPASE-10)活性熒光定量檢測試劑盒 |
大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa分析檢測試劑盒 |
人P物質(SP)elisa檢測試劑盒 |
CTX-TNA2大鼠腦I型星形膠質細胞小鼠腎上腺素能受體β1(ADRβ1)elisa檢測試劑盒 |
LSM5蛋白抗體 |
轉錄因子BTF3抗體 |
LSM5 |
BTF3 |
實驗步驟:
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉染前24 h進行細胞鋪板,轉染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養基替換含有病毒的培養基,并繼續培養;
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養,直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩轉細胞系。