運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

Walker/LLC-WRC 256大鼠腹水癌細胞

英文名稱	Walker/LLC-WRC 256:WalkerLLCWRC 256	產品形態	母細胞樣 懸浮生長
貨號	P-X1150	產品分類	大鼠細胞系
規格	1×106	包裝	株
來源	乳腺	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

細胞別稱：Walker/LLC-WRC 256; Walker-256; Walker-Ca.256; Walker 256; W256

種屬來源：大鼠

年齡性別：

組織來源：乳腺

生長特性：懸浮生長

細胞形態：母細胞樣

背景簡介：LLC-WRC 256細胞注入大鼠腹腔能快速形成腹水瘤，是研究抗腫瘤體內模型的極好材料。

生物等級：1

細胞規格：1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測：無

基因表達情況：

保藏機構：ATCC; CCL-38 ECACC; 87061101

培養基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                      
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二、細胞培養操作:

1) 復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜 (或將細胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養基，培養過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。 a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養瓶置于 37℃培養箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml完全培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產品：

NLRP13蛋白抗體	羧基端小結構域磷酸酶2抗體 CTDSP2
NLRP13	21號染色體開放閱讀框66抗體 C21orf66
8號染色體開放閱讀框77抗體	Ras相關GTP結合蛋白抗體 RPH3AL
C8orf77	PYROXD2蛋白抗體 PYROXD2
5號染色體開放閱讀框34抗體 C5orf34	調節因子X結合蛋白RFXAP抗體 RFXAP
肌微管素相關蛋白4抗體 MTMR4	液泡蛋白分選蛋白37C抗體 VPS37C
脊髓小腦共濟失調2型蛋白抗體 ATX2	低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體 ARH
血小板白細胞C激酶底物源結構域M3抗體 PLEKHM3	短卷曲螺旋蛋白SCOC抗體 SCOC
白藜蘆醇含量測試盒	FITC標記人CD28單克隆抗體 human CD28/FITC
細胞TSH-BETA蛋白表達熒光定量檢測試劑盒	FLJ42569蛋白抗體 FLJ42569
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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶試劑盒	腦啡肽酶2抗體 Neprilysin 2
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人高半胱氨酸(Hcy)elisa分析檢測試劑盒	Walker/LLC-WRC 256大鼠腹水癌細胞植物(擬南芥)超氧化物歧化酶[鐵],葉綠體(SODB)elisa檢測試劑盒
小鼠基質細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)elisa分析檢測試劑盒	人血液轉鐵蛋白（TRANSFERRIN）比濁法定量檢測試劑盒
大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(sIL-1RⅡ)elisa檢測試劑盒	人α-防御素4(NP-4)elisa檢測試劑盒免費代測

三、培養注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。 
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。