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英文簡稱
規格
貨號
bEnd.3:bEnd3
1×106
P-X1036
產品詳情：
生長特性 貼壁細胞
細胞形態 上皮細胞樣
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養方案A（默認）
生長培養基:
DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培養條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2-3次/周
注意事項 1.該細胞在低密度下形態不規則，細胞數量少，鋪展面積大，高密度后形態會趨于一致，胞體密集；2.細胞增殖偏慢，初次傳代建議1:2，細胞穩定后建議傳代比例也不超過1:4；3.注意觀察培養基顏色，顏色偏紫會導致細胞漂浮增加；4.消化時間會隨著細胞生長時間和細胞密度而有所不同，需要結合消化時細胞狀態來判斷，消化到細胞可以滑落方可終止。
參考資料(來源文獻)
背景描述 The cells were transformed by infection with the NTKmT retrovirus vector that expresses polyomavirus middle T antigen
年齡（性別） 6周齡
組織來源 大腦皮層
細胞類型 轉化細胞系
生物等級 BSL-1
抗原表達情況 ICAM-1 +; VCAM-1 +; MAdCAM-1 +
基因表達情況 von Willebrand factor,ICAM-1 +; VCAM-1 +; MAdCAM-1 +,The endothelial nature of these cells was confirmed by the observed expression of von Willebrand factor and uptake of fluorescently labeled low density lipoprotein (LDL).,The expression of Peyer's Patch high endothelial receptor for lymphocytes, the mucosal vascular addressin (MAdCAM-1) and E-selectin can be induced on bEnd
保藏機構 ATCC; CRL-2299 BCRC; 60515 ECACC; 96091929
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備DMEM培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
實驗原理：
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養基替換含有病毒的培養基，并繼續培養；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩轉細胞系。
公司正在出售的產品：
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NLRP8蛋白抗體 |
蝌蚪雌二醇(E2)elisa分析檢測試劑盒 |
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NLRP8 |
通用型賴（lysine）含量熒光定量檢測試劑盒 |
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HumanPGP9.5ELISAKit |
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GPROPDR |
人蛋白基因產物9.5(PGP 9.5)elisa分析檢測試劑盒 |
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小鼠胞外超氧化物歧化酶(SOD3)elisa檢測試劑盒 |
E2 ELISA kit |
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貂環磷酸腺苷(cAMP)elisa檢測試劑盒免費代測 |
MUTED |
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位素法DNA斑點雜交試劑盒 |
FAM47E蛋白抗體 |
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MUTED蛋白抗體 |
FAM47E |
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Cy5標記的兔抗小鼠IgG H&L-Fc |
TUB蛋白抗體 Anti-TUB 1 |
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Rabbit Anti-Mouse IgG Fc / Cy5 |
RAN GTPase酶激活蛋白1抗體 Anti-RanGAP1 |
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乙基丙二酸腦病蛋白抗體 |
磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體 Anti-Phospho-NFKB1(Ser932) |
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ETHE1 |
Smad4抗體 Anti-Smad4 |
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人T細胞活化連接蛋白(LAT)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠胃泌酸調節素elisa分析檢測試劑盒 |
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HumanLATELISAKit |
bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株MouseoxyntomodulinELISAKit |
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大鼠凋亡誘導因子(AIF)elisa分析檢測試劑盒 |
山羊補體蛋白3(C3)elisa分析檢測試劑盒 |
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AIF ELISA Kit |
C3ELISAKit |