運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

MDA-MB-436人乳腺癌細胞

英文名稱	MDA-MB-436:MDAMB436	產品形態	多角形 貼壁細胞
貨號	P-X845	產品分類	人類細胞系
規格	1×106	包裝	株
來源	乳腺腺癌胸水轉移灶	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 多角形

生長培養基 Leibovitz's L-15＋10μg/ml Insulin＋16μg/ml Glutathione＋15% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，100%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:3

推薦換液頻率 2~3次/周

注意事項 1、該細胞推薦使用Leibovitz's L-15培養基進行培養，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會產生細胞毒性； 2、如您沒有無二氧化碳的培養箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培養基時即可正常通入5%二氧化碳； 3、配套專用培養基默認Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，請聯系銷售下單備注更改。

背景描述 MDA-MB-436細胞源于一名43歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液；MDA-MB-436細胞呈多形性，大多數細胞在間接熒光染色時呈現與抗微管抗體的強烈反應。

年齡（性別） 女性，43歲

組織來源 乳腺腺癌胸水轉移灶

細胞類型 腫瘤細胞

腫瘤類型 乳腺癌細胞

生物等級 1

致瘤性 No, in immunosuppressed mice.Yes, in semisolid medium.

基因表達情況 tubulin; actin

保藏機構 ATCC; HTB-130

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                      
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二、細胞培養操作:

1) 復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜 (或將細胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養基，培養過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。 a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養瓶置于 37℃培養箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml完全培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產品：

絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)elisa分析檢測試劑盒	磷酸化乳腺癌易感基因相互作用蛋白1抗體 phospho-BRIP1/BACH1 (Ser990)
MAPK ELISA Kit	鋅指蛋白213抗體 ZNF213
人白介素24(IL-24)elisa分析檢測試劑盒	DUS2L蛋白抗體 DUS2L
HumanIL-24ELISAKit	DMRT1蛋白抗體 DMRT1
鋅指蛋白587抗體 ZNF587	磷酸化細胞信號轉導分子SMAD5抗體 phospho-SMAD5 (Ser463 + Ser465)
表皮生長因子反應蛋白2抗體 BRF2	嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1前體蛋白抗體 CCL1 precursor
叉頭蛋白L2抗體 FOXL2	O6甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶抗體 MGMT
腎素/血管緊張素形成酶Ren1抗體 Renin	PE-Cy5.5標記小鼠CD4單克隆抗體 Mouse CD4/PE-Cy5.5
大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)elisa分析檢測試劑盒	轉移生長因子β受體3抗體 TGF beta Receptor III
小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)elisa檢測試劑盒	組蛋白賴氨酸N-甲基EZH1抗體 EZH1
進行凝集（aggregation）采用典型的夾心法酶聯吸附測定。所提供的elisa檢測試劑盒是典型的夾心法酶聯吸附測定elisa檢測試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。	核酸酶抗體
血液甘肽過氧化物酶（GSH PX）活性酶動力比色法定量檢測試劑盒	環指蛋白5抗體 RING5
小鼠組織蛋白去乙酰化酶2(Hdac2/Yy1bp)elisa檢測試劑盒	蛋白胨鐵瓊脂平板
大鼠前列腺素E1（PGE1）elisa檢測試劑盒	MDA-MB-436人乳腺癌細胞兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)elisa分析檢測試劑盒
人S100鈣結合蛋白P(S100P)elisa分析檢測試劑盒	小鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)elisa分析檢測試劑盒
體液尿激酶（UROKINASE）活性熒光定量檢測試劑盒	大鼠固醇調節元件結合蛋白1A(SREBP-1A)elisa檢測試劑盒

三、培養注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。 
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。