干冰運輸及復蘇好存活細胞

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

BT-549人乳腺導管癌細胞

英文名稱	BT-549:BT549	產品形態	上皮細胞樣 貼壁生長
貨號	P-X669	產品分類	人細胞系
規格	1×106	包裝	株
來源	乳腺；乳腺導管癌	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

細胞別稱：BT 549; BT.549; BT549；人乳腺管癌細胞

種屬來源：人

年齡性別：女；72歲

組織來源：乳腺；乳腺導管癌

生長特性：貼壁生長

細胞形態：上皮細胞樣

背景簡介：BT-549細胞1978年由W.G.Coutinho和E.Y.Lasfargues建系，源自一位72歲患有乳腺導管癌的白人女性，來源組織是一個狀侵入性導管瘤，7個局部結中3個已有轉移。由此組織建立的BT-549細胞是多態性的，包括上皮細胞樣組分和多核巨細胞。該細胞形態：包括上皮樣細胞及多核巨細胞，可分泌一種粘性物質。

生物等級：1

細胞規格：1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測：無

基因表達情況：

保藏機構：ATCC; HTB-122；中國醫學科學院基礎醫學研究所細胞資源中心

培養基：89%DMEM+10%FBS+1%PS+0.01mg/ml insulin

培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

倍增時間：~54-90 hours

STR鑒定位點Amelogenin：X；CSF1PO： 10，12；D13S317：11；D16S539：8；D18S51：15；D19S433：15.2；D21S11：32.2；D2S1338：17；D3S1358：18；D5S818：11；D7S820：9，10；D8S1179：14，16；FGA：19；TH01：9.3；TPOX：8；vWA：15；

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                      
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二、細胞培養操作:

1) 復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜 (或將細胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養基，培養過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。 a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養瓶置于 37℃培養箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml完全培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產品：

黑色素瘤相關抗原D4抗體	MARVEL蛋白家族D2抗體
MAGD4	信號感應增殖相關蛋白1抗體  Anti-SPA-1/SIPA-1
無精癥缺失基因2抗體	Desmoglein 4
DAZ2	橋粒芯糖蛋白4抗體
E3泛素蛋白連接酶144A抗體  Anti-RNF144	MARVELD2
A型流感核蛋白抗體  Anti-H1N1 Nucleoprotein	TIRAP
p21調控蛋白WISP39抗體  Anti-WISP39/FKBPL	MOSPD2蛋白抗體
白細胞介素1受體銜接蛋白抗體	MOSPD2
FITC標記兔IgG（型對照)	線性泛素鏈相關蛋白SHARPIN抗體  Anti-SHARPIN
Rabbit IgG / FITC	維生素D低磷性佝僂病蛋白  Anti-PHEX
G蛋白結合蛋白4/慢性腎功能衰竭蛋白抗體	磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗體  Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246)
GTPBP4	突觸融合蛋白結合蛋白5抗體  Anti-Tomosyn/STXBP5
大鼠基質金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)elisa分析檢測試劑盒	小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)elisa分析檢測試劑盒
TIMP-3 ELISA Kit	BT-549人乳腺導管癌細胞PⅢPELISAKit
人類狀瘤病毒HPV116 gp2抗體	三號染色體開放閱讀框抗體
HPV116 gp2	APRG1

三、培養注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。 
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。