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PCR定量試劑盒的注意事項介紹
日期：2025-05-07 08:27
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摘要：
PCR定量試劑盒的注意事項
由于本品檢測靈敏度極高，即使空氣中微量的DNA氣溶膠都可以引起污染，進而導致實驗失敗。因此反應體系配制時請于超凈工作臺內進行，配制過程中請使用干凈**槍頭、反應管，條件容許的實驗室推薦使用專用的移液槍，避免交叉污染;
由于本品中含有熒光染料SYBRGreen I，因此無論保存還是配置反應體系時都應該盡量避免強光照射;
本產品中不含用以校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差的Rox ReferenceDye，客戶可根據qPCR儀器技術指導決定是否需要加ROX內參染料，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差;
建議在冰上配制PCR反應液，再放入PCR儀器中擴增。可以提高擴增特異性，減少背景;
模板DNA：用本產品，cDNA、基因組DNA、質粒DNA、病毒DNA等都可作為模板。在添加DNA模板時請注意模板量對PCR擴增的影響。本產品建議添加量為：
cDNA添加量不應超過總反應體系的10%；基因組DNA為模板時，為避免在高濃度區域出現線性差的情況，請注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作為PCR模板，添加時請以300ng為上限；由于質粒DNA濃度和拷貝數很高，在添加PCR模板之前*好進行稀釋梯度試驗，以便確定合適的質粒DNA拷貝數。
由于本品檢測靈敏度極高，即使空氣中微量的DNA氣溶膠都可以引起污染，進而導致實驗失敗。因此反應體系配制時請于超凈工作臺內進行，配制過程中請使用干凈**槍頭、反應管，條件容許的實驗室推薦使用專用的移液槍，避免交叉污染;
由于本品中含有熒光染料SYBRGreen I，因此無論保存還是配置反應體系時都應該盡量避免強光照射;
本產品中不含用以校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差的Rox ReferenceDye，客戶可根據qPCR儀器技術指導決定是否需要加ROX內參染料，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差;
建議在冰上配制PCR反應液，再放入PCR儀器中擴增。可以提高擴增特異性，減少背景;
模板DNA：用本產品，cDNA、基因組DNA、質粒DNA、病毒DNA等都可作為模板。在添加DNA模板時請注意模板量對PCR擴增的影響。本產品建議添加量為：
cDNA添加量不應超過總反應體系的10%；基因組DNA為模板時，為避免在高濃度區域出現線性差的情況，請注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作為PCR模板，添加時請以300ng為上限；由于質粒DNA濃度和拷貝數很高，在添加PCR模板之前*好進行稀釋梯度試驗，以便確定合適的質粒DNA拷貝數。
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