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了解大腸桿菌表達系統的組成
日期：2025-05-06 12:11
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摘要：
大腸桿菌表達系統的組成：表達載體、外源基因、表達宿主菌。
一、表達載體：
一個完整的質粒載體需要有：復制起點、啟動子、插入的目的基因、篩選標記以及終止子。
二、外源基因：
在大腸桿菌表達體系中要表達的基因即外源基因，包括原核基因和真核基因。原核基因可以在大腸桿菌中直接表達，但是真核基因含有內含子，大腸桿菌不能對mRNA進行剪切，從而真核基因一般以cDNA的形式在大腸桿菌表達系統中表達。目的蛋白在大腸桿菌系統表達中的形式有二種。一種是在細胞內...
大腸桿菌表達系統的組成：表達載體、外源基因、表達宿主菌。
一、表達載體：
一個完整的質粒載體需要有：復制起點、啟動子、插入的目的基因、篩選標記以及終止子。
二、外源基因：
在大腸桿菌表達體系中要表達的基因即外源基因，包括原核基因和真核基因。原核基因可以在大腸桿菌中直接表達，但是真核基因含有內含子，大腸桿菌不能對mRNA進行剪切，從而真核基因一般以cDNA的形式在大腸桿菌表達系統中表達。目的蛋白在大腸桿菌系統表達中的形式有二種。一種是在細胞內表現為不溶性的包涵體顆粒。另一種是在細胞內表現為可溶性的蛋白質?？扇苄缘哪繕说鞍踪|除可存在于細胞質中外，還可借助于本身的功能序列和大腸桿菌蛋白質加工、運輸體系，*終分泌到周質空間，或外泌到培養液中。
圖2：外源基因在大腸桿菌中高效表達的原理
三、宿主細胞：
大腸桿菌蛋白表達過程中很重要的因素就是宿主細胞的選擇。對于宿主細胞的選擇主要根據宿主細胞各自的特征及目的蛋白的特性。對于是適合目的基因表達的宿主細胞主要有以下要求：①容易獲得較高濃度的細胞 ②能利用易得廉價原料 ③不致病、不產生內毒su ④發熱量低、需氧低、適當的發酵溫度和細胞形態 ⑤容易進行代謝調控 ⑥容易進行DNA重組技術操作 ⑦產物的產量、產率高 ⑧ 產物容易提取純化。