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實驗室細胞復蘇具體過程
日期：2025-05-07 03:50
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摘要：
細胞復蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細胞解凍，再培養傳代。細胞復蘇應采用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細胞外結晶在很短的時間內融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細胞內再結晶，從而對細胞再次造成傷害，從而影響細胞的存活率。
細胞復蘇具體過程：
1：細胞是凍在-80℃的環境里面的，所以拿出來后，應該盡快去37℃水浴鍋里解凍（我一般是放在PE手套里面，然后在37攝氏度的水域上快速融化。）這一步的操作不要超過一分鐘！
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細胞復蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細胞解凍，再培養傳代。細胞復蘇應采用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細胞外結晶在很短的時間內融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細胞內再結晶，從而對細胞再次造成傷害，從而影響細胞的存活率。
細胞復蘇具體過程：
1：細胞是凍在-80℃的環境里面的，所以拿出來后，應該盡快去37℃水浴鍋里解凍（我一般是放在PE手套里面，然后在37攝氏度的水域上快速融化。）這一步的操作不要超過一分鐘！
2：用預熱的培養基稀釋凍存的細胞（這步我會把融化的凍存液加入到15ml的管子里，加入3ml的預熱的培養液，在超凈臺里完成）
3：離心200g 5-10min，具體的離心的時間不同的細胞略有不同得具體得看培養的protocol
4：在離心以后，倒掉上清（因為凍存液里用DMSO, 它的作用是在凍存細胞時加入，加入的量大概是總體積的10%，起到防凍劑的作用，防止冷凍過程中細胞內形成冰晶。）
5：用預熱的培養液重懸細胞（根據培養的細胞皿的體積調整，我參照了GM12878,K562的培養protocol，剛開始的細胞密度不要超過10^6 /ML，但是細胞的密度也別太稀了，要不然長的會不好)
6：放到37℃，5%的二氧化碳培養箱中培養細胞。
PS：在看細胞凍存和復蘇的時候，有一個詞叫做“慢凍快融”，所以在解凍細胞的時候，在加入預熱的培養基洗細胞之前，操作盡量的快，減少DMSO對細胞的傷害。我的凍存液的配方是：90%的FBS+10%的DMSO，凍存效果沒問題！