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注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 |
規格 |
貨號 |
50T豬圓環病毒1型/2型(PCV-1/PCV-2)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64136 |
它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經過優化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據高度保守區設計,不會跟其他病毒的RNA發生交叉反應。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。
6. 本產品只能用于科研。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
甲狀腺核轉錄因子-1抗體英文名稱:TTF1 0.1ml
轉鈷胺素蛋白2抗體英文名稱:TCN2 0.2ml
跨膜蛋白74抗體英文名稱:TMEM74 0.2ml
轉鐵蛋白受體2抗體英文名稱:TFR2 0.2ml
壞死因子受體超家族成員13B抗體英文名稱:TACI 0.2ml
Toll樣受體8抗體英文名稱:TLR8 0.1ml
胸腺素抗體英文名稱:Thymulin 0.2ml
α微管蛋白乙酰轉移酶1抗體英文名稱:α-TAT 0.2ml
TANC1蛋白抗體英文名稱:TANC1 0.1ml
遺傳性耳聾β-tectorin抗體英文名稱:TECTB 0.2ml
谷氨酰胺轉胺酶2抗體英文名稱:Transglutaminase 2 0.2ml
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶TNN13K抗體英文名稱:TNNI3K 0.2ml
環指蛋白16抗體英文名稱:RNF16 0.2ml
白細胞介素1受體銜接蛋白抗體英文名稱:TIRAP 0.2ml
胸腺五肽抗體英文名稱:TP-5/Thymopentin 0.1ml
50T豬圓環病毒1型/2型(PCV-1/PCV-2)PCR檢測試劑盒磺胺嘧啶鈉溶液(12mg) Sodium sulfadiazine 1ml*5
WILKINS-CHALGREN瓊脂 WILKINS-CHALGREN Agar 250g
MCP瓊脂 MCP Agar 250g
SC瓊脂基礎 Sulfite Cycloserine Agar Base 250g
明膠磷酸鹽緩沖液 250g
含1%棉籽糖的PY培養基 1ml*20支
梭屬測定用培養基 Clostridium Test Medium 250g
硫酸慶大霉素 1ml*5支
液體硫乙醇酸鹽培養基管 20ml*10支
胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉湯(TGPY) 250g
厭氧卵黃瓊脂基礎 250g
胰胨-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂基礎 TSC Agar Base 250g
D-環絲氨酸溶液 5ml*10