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產品詳情
  • 產品名稱:小鼠肺上皮細胞+LUC;TC-1-LUC

  • 產品型號:P-X11308
  • 產品**:派瑞曼
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簡單介紹:
小鼠肺上皮細胞+LUC;TC-1-LUC公司正在出售的產品:SK-MEL-28黑素瘤細胞 磷酸乙醇胺轉移酶2抗體 NTRK1 ELISA Kit 神經營養的酪氨酸激酶定量elisa kit 磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 SNU-2315非小細胞肺癌細胞
詳情介紹:

小鼠肺上皮細胞+LUC;TC-1-LUC


英文簡稱

規格

貨號

TC-1-LUC

1×106

P-X11308

產品詳情:


細胞別稱;TC-1-LUC;小鼠肺上皮細胞-熒光素酶標記;小鼠肺上皮細胞-LUC

種屬來源;小鼠

組織來源;肺

生長特性;貼壁生長

細胞形態;上皮細胞樣

細胞代數;10代以內

背景簡介;Luciferase TC-1細胞穩定表達螢火蟲熒光素酶。該細胞株性狀穩定,培養時不需要添加維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。TC-1細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。TC-1細胞為HPV16E6E7ras基因共轉化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細胞。

細胞規格;1×10 6cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測;無

培養基;90%1640+10%FBS+PS+1. 0ug/ml puro

培養條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

凍存條件;無血清凍存液,液氮儲存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代。
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備DMEM培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二.細胞處理:

1)凍存細胞的復蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜

。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

實驗原理:


實驗步驟:


1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉染前24 h進行細胞鋪板,轉染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養基替換含有病毒的培養基,并繼續培養;
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養,直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩轉細胞系。

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