服務流程： 

（1）客戶提供：目的細胞具體信息；

（2）操作過程：細胞復蘇培養，細胞發貨；

（3）交付內容：細胞系/細胞株，以及細胞使用說明書。

培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中； 

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

實驗要點及說明 ：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時（4h左右），穩定細胞狀態，切忌在溫箱內靜置過夜。

3. 靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4. 貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內的培養基，留8ml繼續培養至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。

5. 細胞瓶內的培養基含血清和雙抗，可收集后4℃保存備用，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基，一半用客戶自備的培養基，使細胞逐漸適應培養條件，以免因不適應而造成生長狀態不佳。

6. 細胞胰酶消化液建議使用PBS配制，

7. 因為細胞培養過程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過一周的細胞我們會酌情處理，但不提供免費更換服務。 細胞運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

"10 mg 5（6）-TRITC Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100 mg 5-Carboxyfluorescein Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
10 mg 5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100 mg Acridine Orange（AO） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 g 5-FITC Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
0.2 ml Actin-Tracker Green（微絲綠色熒光探針) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg BCECF AM Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100 mg Calcein Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250 mg Calcein Blue  Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100 mg Calcein M  Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
5 mg CFDA SE （  增殖示蹤熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100 mg Congo Red  Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
12x50nm Cyanine 3-NHS Ester Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
細胞系人 DEK 基因全長ORF克隆
人 PDS5B 基因全長ORF克隆
人 TBCE 基因全長ORF克隆
人 BAIAP2 基因全長ORF克隆
人 CYP11A1 基因全長ORF克隆
人 MSL3 基因全長ORF克隆
人 DPYS 基因全長ORF克隆
人 BAIAP2L2 基因全長ORF克隆
人 HINFP 基因全長ORF克隆
人 KIAA0141 基因全長ORF克隆
人 DHCR24 基因全長ORF克隆"

操作流程：

1、您收到母細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮完全培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml完全培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞完全貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）換用新鮮完全培養基繼續培養。