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細胞接收后的處理：
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。
K7M2WT(K7M2-WT)-LUC小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光素酶標記
英文簡稱
規格
貨號
K7M2WT(K7M2-WT)-LUC:K7M2WTK7M2WTLUC
1×106
P-X1065
產品詳情：
細胞介紹
抗原表達: CD31 陽性 [PubMed:1315100] 產物: 八因子 [PubMed: 11315100]; 整合唾液酸蛋白 (BSP) [PubMed11315100]; biglyan [PubMed: 11315100]; decorrin [PubMed:1315100]; villin 2 (ezrin) [PubMed: 11325848]. 骨唾液酸蛋白, biglyan, decorrin, 和 osteopontin 的表達顯示其骨家族細胞特性。 在本庫通過支原體檢測。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。
細胞特性
1） 來源：BALB/c 器官: 骨 : 骨肉瘤 來源轉移灶: 肺 細胞類型: 成骨細胞;
2） 形態：成骨細胞 貼壁生長
3） 含量：>1×10? 細胞數
4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用。
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
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魚腎上腺髓質素(ADM)elisa分析檢測試劑盒 |
核孔復合蛋白Nup133抗體 |
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ADM ELISA kit |
DNA拓普西異構酶ⅡA抗體 Anti-TOP2 alpha |
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人超敏熱休克蛋白70(HSP-70)elisa分析檢測試劑盒 |
HBLD2 |
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HSP-70ELISAKit |
鐵硫簇整合源物2蛋白抗體 |
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胎盤生長因子抗體 Anti-PLGF |
NUP133 |
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磷酸化酶激酶γ1 Anti-PHKG1 |
phospho-Kv2.1 (Ser805) |
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絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SRPK2抗體 Anti-SRPK2 |
嗅覺受體5M10抗體 |
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磷酸化鉀通道蛋白DRK1抗體 |
OR5M10 |
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大鼠Syndecan-1/CD138(SDC1)elisa分析檢測試劑盒 |
磷酸化DNA結合蛋白B抗體 Anti-Phospho-YB1(Ser102) |
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SDC1 ELISA Kit |
嘌呤霉素敏感性氨肽酶蛋白抗體 Anti-NPEPPS/PSAP |
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人胱天蛋白酶8(Casp-8)elisa分析檢測試劑盒 |
RMND5B蛋白抗體 Anti-RMND5B |
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Casp-8ELISAKit |
磷酸化鋅指轉錄因子Slug+SNAIL抗體 Anti-phospho-SNAIL + SLUG(Ser246) |
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GSK-3BETA蛋白共沉淀分析試劑盒 |
位素核酸蛋白結合凝膠遷移電泳分析（EMSA）試劑盒 |
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黃嘌呤氧化酶（XOD）測試盒 |
K7M2WT(K7M2-WT)-LUC小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光素酶標記小鼠兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)elisa檢測試劑盒 |
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賴氨酰氧化酶樣3抗體 |
親環蛋白（親環素）40抗體 |
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LOXL3 |
Cyclophilin 40/PPID |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養基替換含有病毒的培養基，并繼續培養；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩轉細胞系。