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細胞接收后的處理：
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。
英文簡稱
規格
貨號
MDA-MB-415:MDAMB415
1×106
P-X843
產品詳情：
生長特性
貼壁細胞
細胞形態
上皮細胞樣
生長培養基 Leibovitz's L-15＋10μg/ml Insulin＋10μg/ml Glutathione＋15% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養條件
氣相：空氣，100%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:3
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 1、該細胞推薦使用Leibovitz's L-15培養基進行培養，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會產生細胞毒性； 2、如您沒有無二氧化碳的培養箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培養基時即可正常通入5%二氧化碳； 3、配套專用培養基默認Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，請聯系銷售下單備注更改。
背景描述 MDA-MB-415細胞源于一名38歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液，MDA-MB-415細胞表達WNT7B癌基因。MDA-MB-415細胞形成平展延伸的上皮細胞樣，在電鏡下呈現結節，伴隨著延伸的微管和微板。MDA-MB-415細胞不容易用yi酶消化。
年齡（性別）
女性，38歲
組織來源
未知
細胞類型
腫瘤細胞
腫瘤類型
乳腺癌細胞
生物等級 1
致瘤性 No, in immunosuppressed mice.Yes, in semisolid medium.
抗原表達情況 Blood Type O
基因表達情況 amelogenin (X chromosome)(AMELEX)
保藏機構 ATCC; HTB-128
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
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大象睪酮(T)elisa分析檢測試劑盒 |
主導控制樣蛋白1抗體 |
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Elephant Testosterone(T)ELISA kit |
磷酸化核基質結合區結合蛋白1抗體 Anti-Phospho-SATB1 (Ser47) |
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人大腸癌專一抗原4(CCSA-4)elisa分析檢測試劑盒 |
C17orf53 |
|
CCSA-4ELISAkit |
17號染色體開放閱讀框53抗體 |
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環指蛋白31抗體 Anti-RNF31/HOIP |
MAML1 |
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鼻咽癌相關蛋白6抗體 Anti-CCDC136/NAG6 |
TCN2 |
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磷酸化WEE1蛋白抗體 Anti-Phospho-Wee1(Ser53) |
β連環蛋白樣蛋白1抗體 |
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轉鈷胺素蛋白2抗體 |
CTNNBL1 |
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PE標記牛IgG |
角質蛋白β抗體 Anti-SPRR3/Cornifin B |
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Bovine IgG / PE |
蛋白酪氨酸磷酸酶CD148抗體 Anti-PTP/PTPase/CD148 |
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GRAMD4蛋白抗體 |
磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1 Anti-Phospho-PDK1(Ser241) |
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GRAMD4 |
胸腺細胞核蛋白1抗體 Anti-THYN1 |
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大鼠甲狀腺球蛋白IgG抗體elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠Apelin 13(AP13)elisa分析檢測試劑盒 |
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Rat Thyroglobulin IgG antibody ELISA Kit |
MDA-MB-415人乳腺癌細胞AP13ELISAKit |
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組織胺N-甲基轉移酶抗體 |
高爾基復合體相關蛋白1抗體 |
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HNMT |
ACBD3 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養基替換含有病毒的培養基，并繼續培養；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩轉細胞系。