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PCR 與RT—PCR的概念及原理

日期:2025-05-06 12:00
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摘要: 聚合酶鏈式反應(PCR)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的*大特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。 原理是提取組織或細胞中的總RNA或者mRNA,在反轉錄酶的作用下將RNA或者mRNA反轉錄成cDNA,再以該cDNA**鏈為模...



聚合酶鏈式反應(PCR)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的*大特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。

 

RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。

原理是提取組織或細胞中的總RNA或者mRNA,在反轉錄酶的作用下將RNA或者mRNA反轉錄成cDNA,再以該cDNA**鏈為模板進行PCR擴增,根據靶基因設計用于PCR擴增的基因特異的上下游引物,基因特異的上游引物與cDNA*1鏈退火,在Taq DNA聚合酶作用下合成cDNA第2鏈。再以cDNA**鏈和第2鏈為模板,用基因特異的上下游引物PCR擴增獲得大量的cDNA。


Real-time PCR(實時熒光定量PCR)也可以縮寫為RT—PCR,此外還有一個qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR ),有人可能將這三者搞混。

其實Rea-ltime-PCR和 qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR )都是指實時定量PCR,即在PCR進行的同時,對其過程進行實時監測,可以對起始模板數量進行**的分析。并且國際上的約定俗成的是:RT-PCR特指反轉錄PCR,而Real-time PCR一般縮寫為 qPCR(quantitative real-time PCR)。

RT-PCR的方法已經廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。