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細胞轉染注意事項
日期：2025-05-06 12:42
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摘要：
1.如為貼壁生長細胞，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，*好在轉染前4h換一次新鮮培養液。
2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其他化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。
3.培養基中的血清
在開始準備DNA和轉染試劑稀釋液時要使用無血清的培養基，因為血清會影響復合物的形成。其實，只要在DNA-轉染試劑復合物形成時不含血清，在轉染過程中是可以使用血清的。
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1.如為貼壁生長細胞，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，*好在轉染前4h換一次新鮮培養液。
2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其他化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。
3.培養基中的血清
在開始準備DNA和轉染試劑稀釋液時要使用無血清的培養基，因為血清會影響復合物的形成。其實，只要在DNA-轉染試劑復合物形成時不含血清，在轉染過程中是可以使用血清的。
4.培養基中的抗生su
抗生su是影響轉染的培養基添加物。這些抗生su 一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使抗生su可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率降低。這時候可以選擇英格恩生物的Entranster轉染試劑，非脂質體試劑，培養基可加抗生su，避免了細胞染菌。
5.設置陽性對照和陰性對照。
6.一般在轉染24-48h，靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的，24-48h后即可進行靶基因表達的檢測實驗。
7.如若建立穩定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥wu，常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素和新霉素等。